Guías de estudio para el laboratorio de microbiología

 

 Guía de estudio Examen 2

1. ¿Técnica utilizada para el aislamiento de cultivos puros?

• Método de placa estriada
• Método de placa pura
• Ambos métodos implican diluir las bacterias de una muestra hasta un punto final en el que una sola célula se divide y da lugar a una colonia pura.

2. Explique la finalidad de teñir los microorganismos.

• Para identificar organismos desconocidos/transparentes. El citoplasma de las bacterias es transparente.

3. Diferencia entre colorantes ácidos y básicos.

• Tintes básicos: comúnmente utilizados para tinciones simples: azul de metileno, fucsina básica y violeta cristal. (color que contiene grupos iónicos: cromóforos que son cationes.
• Colorantes ácidos: cromóforos aniónicos (con carga negativa). No tiñen las bacterias porque el cromóforo aniónico es repelido por la carga negativa de las bacterias.

4. Explique por qué los colorantes básicos son más eficaces para teñir bacterias que los colorantes ácidos.

• Los colorantes básicos se adhieren a la pared celular bacteriana, que tiene carga negativa, debido a su carga positiva. Los colorantes ácidos tienen carga opuesta.

5. Explique por qué la tinción negativa utiliza colorantes ácidos. Enumere dos colorantes ácidos.

• Las tinciones negativas son ácidas (tienen carga negativa) y los cromóforos no penetran en la célula, sino que son repelidos por la célula bacteriana, que tiene una carga similar.

o Nigrosina o Ácido pícrico

6. Conozca los pasos básicos que implica la preparación de una muestra para cultivo.

• Limpiar la diapositiva
• Coge dos vueltas de agua y haz un círculo en el centro del tobogán.
• Utilice una técnica aséptica para aislar las bacterias y colóquelas en un portaobjetos.
• Deje secar la diapositiva.
• Pase la muestra por la llama para eliminar los organismos mediante calor y fijarlos a la muestra.

7. Enumere las razones para fijar la mancha con calor.

• 1. Hace que las células se adhieran al portaobjetos para que no se laven.
• 2: Mata los microorganismos
• 3: Provoca cambios en las células bacterianas que hacen que se tiñan mejor.

8. Explique la diferencia entre preparar una muestra a partir de un cultivo en caldo y un cultivo en medio sólido.

• Los cultivos en caldo son medios líquidos sin agar.

9. Enumere los procedimientos de tinción diferencial que realizó.

• tinción de Gram
• tinción de esporas

10. Enumera los reactivos para la tinción de Gram:
11. Colorante primario: violeta cristal
12. Colorante secundario: safranina
13. Yodo mordiente
14. Agente decolorante: alcohol
15. Explica la función de cada reactivo utilizado en la tinción de Gram.

Violeta cristal: forma un complejo púrpura en la pared celular. Yodo: impide que el violeta cristal se elimine de las bacterias grampositivas. Alcohol: hace que las células retengan el violeta cristal y se vean púrpuras al microscopio. Safranina: tiñe las bacterias gramnegativas de rosa o rojo.

12. Importancia del peptidoglicano en la reacción de Gram

• El peptidoglicano es lo que atrapa los complejos de cristal violeta y yodo, impidiendo su eliminación cuando se decolora la muestra.

 

13. Diferenciar entre bacterias Gram positivas y Gram negativas.

• Gram positivo: permanece coloreado, peptidoglicano grueso de múltiples capas, membrana externa ausente.
• Gram negativas: pierden color después de la decoloración, peptidoglicano delgado, membrana externa.

14. Conozca en detalle el procedimiento de tinción de Gram.

• Después de extender la muestra, teñir con cristal violeta durante 30 segundos.
• Lavar
• Teñir con yodo durante 1 minuto.
• Lavar
• Decolorar (alcohol) 15 s
• Lavar
• Safranina 1 min
• Lavar y luego secar con una toalla.

 

15. ¿Cuál es la diferencia en la estructura de la pared celular (peptidoglicano) entre las bacterias Gram positivas y Gram negativas?

• Las bacterias Gram negativas tienen una pared celular delgada y las Gram positivas tienen un peptidoglicano grueso.

16. Explique la importancia médica del procedimiento de tinción ácido-resistente.

• Es una herramienta importante en la identificación de Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae (lepra).

17. Enumera las especies patógenas de micobacterias.

• Myobacterium leprae
• Mycobacterium tuberculosis
• Mycobacterium smegmatis

 

18. Nombra el género bacteriano que es ácido-resistente.

• Mycobacterium y algunas Nocardia

19. Enumere los reactivos utilizados para la tinción ácido-resistente: a. Colorante primario: fucsina b. Decolorante: alcohol ácido
20. colorante secundario: azul de metileno
21. Explique por qué se utiliza el calor en la tinción ácido-resistente.

• Facilita la penetración de la carbofucsina en la célula. El calor actúa como mordiente, haciendo que el complejo de tinción sea más permeable al ácido micólico.

21. ¿Cuál es la diferencia de color entre las bacterias ácido-resistentes y las no ácido-resistentes después de realizar la prueba de Ziehl-Neelsen?

• Las manchas ácido-resistentes aparecen de color rosa o rojo.
• Las bacterias no ácido-resistentes aparecen de color azul después de la tinción.

22. Enumera los géneros bacterianos que producen endosporas.

• Bacillus y Clostridia

23. ¿Función de la endospora?

• Permite que las bacterias sobrevivan en condiciones ambientales desfavorables para su crecimiento. Resistente al calor, la radiación, los ácidos y muchos productos químicos.

24. Ubicación de las endosporas dentro de las células bacterianas

• Central: en el medio de la célula.
• Terminal: al final de la célula.

25. Nombra el método de tinción utilizado para teñir las endosporas.

• Método de Schaeffer-Fulton

26. Definir: Esporulación, Germinación

• Esporulación: el proceso de formación de esporas
• Germinación: cuando un germen o un ser vivo comienza a brotar o crecer.

27. Enumere los reactivos utilizados para la tinción de esporas: a. Colorante primario: verde malaquita b. Decolorante: agua
28. Colorante de contraste: safranina
29. Explique por qué se aplica calor para la tinción de endosporas.

• Para establecer la esterilidad

29. Función de los flagelos. Métodos utilizados para la determinación de la motilidad.

• Los flagelos permiten que las células se muevan hacia los nutrientes o se alejen de sustancias nocivas, como los ácidos.
• Métodos utilizados:

o Montajes húmedos o Diapositiva de gota colgante o Medios semisólidos

30. ¿Cuál es la utilidad del agar en la preparación de medios de cultivo? Describa los pasos que implica la preparación de medios de cultivo.

• El agar se utiliza para solidificar medios líquidos.
• 1. Calcula la cantidad total de medio necesaria para el experimento. 2. Pesa la cantidad de polvo requerida para disolver en agua destilada. 3. Disuelve el polvo con la varilla de agitación, tapa, tapón de algodón y etiqueta. 4. Coloca el recipiente en un baño de agua (sin que hierva) para disolver el polvo. 5. Esteriliza en autoclave/olla a presión. Deja enfriar el medio y distribúyelo en un recipiente adecuado.

31. Diferenciar entre medios selectivos y medios diferenciales; medios complejos y definidos.

• Medio selectivo: permite el crecimiento de ciertas bacterias, pero inhibe el crecimiento de otras.
• Medio diferencial: contiene sustancias que hacen que algunas bacterias adquieran una apariencia que las distingue de otras bacterias.
• Medio complejo: su composición química exacta varía ligeramente.
• Medio definido: se conoce su composición química exacta.

32. Diferenciar: autótrofos y heterótrofos, quimioorganótrofos, quimiolitótrofos

• Autótrofos: Obtienen sus necesidades de carbono fijando CO2.
• Los heterótrofos obtienen su carbono de compuestos orgánicos como polisacáridos, carbohidratos, aminoácidos, péptidos y proteínas.
• Quimioorganótrofos: obtienen la energía que necesitan de la descomposición de moléculas orgánicas mediante fermentación o respiración.
• Los quimiolitótrofos oxidan iones inorgánicos como el nitrato o el hierro para obtener energía y fijar el CO2.

33. describir la esterilización en autoclave

• Se utiliza para esterilizar medios de cultivo termoestables. .
• Expuesto durante 15-20 minutos a vapor a presión, genera temperaturas de 121 °C.

Técnica de Microbiología de Medio Término utilizada para el aislamiento de cultivos puros? Placa de estrías o de vertido Explique el propósito de teñir microorganismos Las bacterias son incoloras y difíciles de ver si no se tiñen. Teñir microorganismos ayuda con el diagnóstico de bacterias ya que ayuda a identificar por la diferenciación de color de los colorantes de tinción. Diferencie entre colorantes ácidos y básicos Los colorantes ácidos tienen carga negativa, al igual que las paredes celulares bacterianas, por lo que el colorante es repelido. Los colorantes ácidos se unen a las células con carga positiva. Los colorantes básicos son los más utilizados en bacteriología. Explique por qué los colorantes básicos son más efectivos para teñir bacterias que los colorantes ácidos. El hecho de que las bacterias tengan una carga ligeramente negativa produce una atracción pronunciada entre estos cromóforos catiónicos y el organismo. Los colorantes que tienen cromóforos aniónicos, los cromóforos aniónicos, eosinato, no tiñen las bacterias debido a las fuerzas de repulsión electrostática involucradas. ¿Nombre dos colorantes ácidos? Tinta china, eosina, fucsina ácida, carboifucina Conozca los pasos básicos involucrados en la preparación de un frotis

1. Lave el tobogán con jabón o Bon Ami y agua caliente, eliminando toda la suciedad y la grasa. Sujete el tobogán limpio por los bordes.
2. Escriba las iniciales del organismo o los organismos en el lado izquierdo de la lámina con un lápiz de porcelana para marcar.
3. Para tener un punto de referencia donde colocar los organismos, dibuje un círculo de 1/2 pulgada en la parte inferior del portaobjetos, en el centro, utilizando un lápiz para marcar porcelana.
4. Agite vigorosamente el cultivo y transfiera dos asas de siembra con microorganismos al centro del portaobjetos, sobre el círculo objetivo. Asegúrese de flamear el asa después de que haya tocado el portaobjetos.
5. Esparza los organismos sobre el área del círculo objetivo.
6. Deje que la diapositiva se seque por evaporación natural del agua. No aplique calor.
7. Una vez que la muestra esté completamente seca, pase la lámina portaobjetos por la llama del mechero Bunsen para eliminar por calor y fijar los organismos a la lámina.

Enumere las razones para fijar la muestra con calor. La fijación con calor desnaturaliza las enzimas bacterianas, impidiendo que digieran partes de la célula, lo que provoca su ruptura. También mejora la adhesión de las células bacterianas al portaobjetos. Explique la diferencia entre preparar una muestra a partir de un cultivo en caldo y un cultivo en medio sólido. Agua. Enumere los procedimientos de tinción diferencial que realizó.

1. Cubra la mancha con cristal violeta y déjela reposar durante 20 segundos.
2. Lave brevemente la mancha con un frasco lavador lleno de agua destilada. Escurra el exceso de agua.
3. Cubra la muestra con solución de yodo de Gram y déjela reposar durante un minuto.
4. Retire la tinción de Gram y cubra la muestra con alcohol etílico 95% durante 10 a 20 segundos. Este paso es crucial. Las muestras gruesas requerirán más tiempo que las finas. La decoloración se habrá producido cuando el disolvente salga incoloro del portaobjetos.
5. Detenga la acción del alcohol enjuagando la lámina portaobjetos con agua de la botella lavadora durante unos segundos.
6. Cubra la muestra con safranina durante 20 segundos.
7. Lavar suavemente durante unos segundos, secar con papel absorbente y dejar secar al aire.
8. Examine la muestra bajo inmersión en aceite.

Enumera los reactivos para la tinción de Gram.

• Colorante primario violeta cristal
• Tinción de Gram mordiente
• Agente decolorante 95% etanol
• Colorante secundario safranina

Explica la función de cada reactivo utilizado en la tinción de Gram. Violeta cristal: hace que tanto los organismos Gram (+) como Gram (-) se vuelvan morados. Tinción de Gram (mordiente): cuando se combina con violeta cristal, forma un compuesto relativamente insoluble en las bacterias Gram (+). Safarin: añade un color rosa a las bacterias Gram (-) decoloradas sin afectar el color morado de las bacterias Gram (+). Importancia del peptidoglicano en la pared celular de la reacción de Gram. Diferencia entre bacterias Gram (+) y Gram (-): Las bacterias Gram (-) se decoloran con el alcohol, perdiendo el color morado del violeta cristal. Las bacterias Gram (+) no se decoloran y permanecen moradas. Procedimiento de tinción de Gram.

1. Cubra la mancha con cristal violeta y déjela reposar durante 20 segundos.
2. Lave brevemente la mancha con un frasco lavador lleno de agua destilada. Escurra el exceso de agua.
3. Cubra la muestra con solución de yodo de Gram y déjela reposar durante un minuto.
4. Retire el yodo de Gram y cubra la muestra con alcohol etílico 95% durante 10-20 segundos.
5. Detenga la acción del alcohol enjuagando la lámina portaobjetos con agua de la botella lavadora durante unos segundos.
6. Cubra la muestra con safranina durante 20 segundos.
7. Lavar suavemente durante unos segundos, secar con papel absorbente y dejar secar al aire.
8. Examine la muestra bajo inmersión en aceite.

Explique la importancia médica del procedimiento de tinción ácido-resistente Mycobacterium; Leprae; Tuberculosis Enumere las especies patógenas de Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae Nombre el género bacteriano ácido-resistente Mycobacterium Enumere los reactivos utilizados para la tinción ácido-resistente tinte primario-carbofucsina (rojo) decolorante-ácido-alcohol secundario-azul de metileno (azul) Explique por qué se utiliza calor en la tinción ácido-resistente Para aumentar la penetración del tinte ¿Cuál es la diferencia de color entre las bacterias ácido-resistentes y no ácido-resistentes después de realizar el método de Ziehl-Neelsen? El ácido-resistente es rojo; el no ácido-resistente es azul. Enumere los géneros bacterianos que producen endosporas Bacillus y Clostridium Función de la endospora Es una estructura latente, resistente y no reproductiva producida por un pequeño número de bacterias; su función principal es asegurar la supervivencia de una bacteria durante períodos de estrés ambiental Ubicación de las endosporas dentro de las células bacterianas central, terminal y subterminal Nombre el método de tinción utilizado para la tinción de endosporas Schaeffer-Fulton y Dorner Defina esporulación y germinación Esporulación = la formación de formas casi latentes de bacterias. En un número limitado de bacterias, las esporas pueden preservar el material genético de las bacterias cuando las condiciones son inhóspitas y letales para la forma normal (vegetativa) de las bacterias, por ejemplo, moho, hongos y helechos Germinación = cuando despiertan y se multiplican Enumere los reactivos utilizados para la tinción de esporas colorante primario verde malaquita decolorante agua colorante de contraste safranina Explique por qué se aplica calor para la tinción de endosporas Debido a sus gruesas cubiertas de proteína hechas de queratina, las esporas son altamente resistentes al procedimiento de tinción normal. El verde malaquita es soluble en agua, se introduce en las células con calor y no se adhiere bien a la célula. Se enjuaga fácilmente de las células. Función de los flagelos Métodos utilizados para la determinación de la motilidad La motilidad se puede determinar mediante preparaciones húmedas, portaobjetos de gota colgante, medios semisólidos ¿Cuál es el uso del agar en la preparación de medios de cultivo? Describa los pasos involucrados en la preparación de medios de cultivo. Se utiliza como medio de uso general para el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos no exigentes. Puede cultivar una variedad de tipos de bacterias y hongos, y contiene muchos nutrientes necesarios para el crecimiento bacteriano. No inhibe el crecimiento bacteriano y no se licúa a temperatura ambiente LEA LAS PÁGINAS 72-75 Diferencie entre medios selectivos y diferenciales y medios complejos y definidos Los medios diferenciales son medios que hacen que algunas bacterias adquieran una apariencia diferente a la de otras especies, lo que permite diferenciar una especie de otra. Los complejos se hacen típicamente para extractos ricos de carne o plantas. Los medios definidos se hacen midiendo individualmente todos los componentes. Diferencie: autótrofos y heterótrofos, quimioorganótrofos, quimiolitótrofos Aquellos que pueden utilizar el carbono del dióxido de carbono para la síntesis de todos los materiales celulares se llaman autótrofos. Si deben tener uno o más compuestos orgánicos como fuente de carbono, se les llama heterótrofos. Además, los heterótrofos dependen del dióxido de carbono. Un quimioorganótrofo es un organismo que obtiene energía de la oxidación de compuestos orgánicos reducidos a partir de los cuales los organismos quimioorganótrofos pueden generar energía y sus fuentes de carbono son muy largas, lo que hace que estos microorganismos sean extremadamente versátiles. Un quimiolitótrofo puede utilizar compuestos reducidos inorgánicos como fuente de energía. Este proceso se lleva a cabo a través de la oxidación y la síntesis de ATP. Microbiología (laboratorio) Examen 3: Guía de estudio 1. Defina/describa: a. halófilo Un organismo que requiere un ambiente salino b. osmófilo Cualquier organismo que está adaptado a vivir en ambientes que tienen una alta presión osmótica c. solución hipertónica Las soluciones hipertónicas son diferentes de las soluciones isotónicas en que las células a menudo pierden agua. Las células tienen una concentración de agua que es mayor dentro de la célula que fuera de la célula. Además, los solutos fuera de la célula son mayores que los solutos dentro de la célula. Cuando la ósmosis utiliza la difusión, las células tienden a perder agua porque esta se desplaza desde una zona de alta concentración (dentro de la célula) a una zona de menor concentración (fuera de la célula). Cuando esto ocurre, las células pueden deshidratarse y morir a menos que estén debidamente hidratadas. El mejor ejemplo de una solución hipertónica serían los océanos, porque los solutos (sales) fuera de las células son mayores que dentro de ellas. Por ejemplo, si nadas en el océano, puedes observar que tu cuerpo tiende a deshidratarse debido a que el disolvente (océano) tiene una mayor cantidad de solutos que el interior de tu cuerpo. d. Solución hipotónica Las soluciones hipotónicas son lo opuesto a las soluciones hipertónicas. Las células suelen tener una concentración de agua menor que fuera de ellas. Por consiguiente, los solutos fuera de la célula son menores que los solutos dentro de ella. Como resultado de la difusión, las células tienden a ganar agua porque esta se desplaza desde una zona de mayor concentración (fuera de la célula) a una zona de menor concentración (dentro de la célula). Cuando las células ganan agua, corren el riesgo de romperse a menos que mantengan este equilibrio (a través de una membrana semipermeable). Los hábitats de agua dulce son ejemplos de soluciones hipotónicas porque el agua dulce tiene menos solutos que dentro de las células. Por ejemplo, si permaneces demasiado tiempo en la ducha, notarás que tu piel puede ganar agua y esto a menudo se llama poda. En conclusión, las soluciones hipotónicas, hipertónicas e isotónicas son parte de la vida cotidiana. Sin estas soluciones, los animales marinos, los animales de agua dulce y los pacientes médicos no podrían sobrevivir. e. Solución isotónica La solución más fácil de entender son las soluciones isotónicas. En términos de células colocadas en agua, no ganan ni pierden agua por ósmosis porque la concentración de solutos en la célula es igual a la de los solutos fuera de la membrana semipermeable. Como resultado, no sucede nada porque la concentración de solutos del agua fuera de la célula es igual a la de los solutos dentro de la célula. En el mismo sentido, la concentración de agua en ambos lados también es equivalente. Las soluciones isotónicas se utilizan comúnmente en situaciones médicas. Por ejemplo, los hospitales usan soluciones salinas isotónicas para las vías intravenosas de los pacientes. Si limpias lentes de contacto, usas una solución salina isotónica para limpiar la proteína de tus lentes. La mayoría de las células de nuestro cuerpo son isotónicas. f. Plasmólisis: es cuando las células vegetales pierden agua después de ser colocadas en una solución que tiene una concentración de solutos más alta que la célula. Esto se conoce como una solución hipertónica. El agua fluye fuera de las células y hacia el fluido circundante debido a la ósmosis. Esto hace que el protoplasma, todo el material en el interior de la célula, se encoja alejándose de la pared celular. Una pérdida severa de agua que lleva al colapso de la pared celular puede resultar en la muerte celular. Dado que la ósmosis es un proceso que no requiere energía por parte de la célula y no se puede controlar, las células no pueden evitar que se produzca la plasmólisis. 2. ¿Qué le sucede a una célula si se coloca en una: A. solución hipertónica Se encogerá B. solución hipotónica estallará C. solución isotónica mantendrá su estructura 3. ¿Qué es un antiséptico? es una sustancia que mata o desalienta el crecimiento y desarrollo de microorganismos en la piel, heridas y tejidos del cuerpo. Explique el método del disco de papel de filtro utilizado para evaluar antisépticos. 1. Licúe un tubo de agar nutritivo. 2. Inocule el agar con el organismo. 3. Vierta el agar en una placa de Petri etiquetada. 4. Esterilice las pinzas, tome un disco de papel de filtro estéril y sumérjalo hasta la mitad en el agente. 5. Presione suavemente el disco sobre la superficie del agar. 6. Incube. 4. ¿Cuál es la diferencia entre antiséptico y desinfectante? Tanto los antisépticos como los desinfectantes se utilizan para matar o limitar el crecimiento de microorganismos; sin embargo, difieren en el lugar donde se utilizan. Un antiséptico se utiliza en tejidos y células vivas para destruir cualquier tipo de infección que pueda estar presente en el tejido. Los desinfectantes están destinados a destruir microorganismos que pueden infectar objetos no vivos. Los antisépticos comunes incluyen enjuagues bucales y cremas para el tratamiento de infecciones por hongos. Los desinfectantes se encuentran comúnmente en productos de limpieza del hogar para cocinas, baños y otros artículos de uso frecuente donde se encuentran gérmenes. Tanto los antisépticos como los desinfectantes actúan para matar microbios, pero los antisépticos también deben causar poco o ningún daño a los tejidos del cuerpo, mientras que los desinfectantes no necesitan ser seguros para su uso en tejido vivo. 5. Defina antibióticos. Nombre y explique el método utilizado para la prueba de sensibilidad a los antibióticos. También conocidos como antibacterianos, son medicamentos que destruyen o ralentizan el crecimiento de las bacterias. Incluyen una gama de fármacos potentes y se utilizan para tratar enfermedades causadas por bacterias. La sensibilidad o susceptibilidad a los antibióticos es la susceptibilidad de las bacterias a los antibióticos. Debido a que la susceptibilidad puede variar incluso dentro de una especie (con algunas cepas siendo más resistentes que otras), la prueba de susceptibilidad a los antibióticos (AST) generalmente se lleva a cabo para determinar qué antibiótico será más eficaz en el tratamiento de una infección bacteriana in vivo. La prueba de sensibilidad a los antibióticos a menudo se realiza mediante el método de Kirby-Bauer. Se colocan pequeñas obleas que contienen antibióticos en una placa sobre la cual crecen bacterias. Si las bacterias son sensibles al antibiótico, se observa un anillo claro, o zona de inhibición, alrededor de la oblea que indica un crecimiento deficiente.[1] Otros métodos para probar la susceptibilidad antimicrobiana incluyen el método de Stokes, Etest (también basado en la difusión de antibióticos), métodos de dilución en agar y caldo para la determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI).[2][3] Los resultados de la prueba se informan en el antibiograma. 6. Diferenciar entre antibiótico y antimicrobiano Ambos inhiben el crecimiento de o matan microorganismos. Los antibióticos se producen naturalmente a partir de mohos o bacterias. Los antimicrobianos también se pueden sintetizar químicamente, pero el término abarca ambos. 7. Diferenciar entre antibiótico de espectro reducido y de amplio espectro Los de espectro reducido actúan contra un pequeño número de especies, por ejemplo, solo Gram(+). Los de amplio espectro actúan contra una amplia variedad, es decir, tanto Gram(+) como Gram(-). 8. Definir/describir: a. metabolismo Toda la gama de procesos bioquímicos que ocurren dentro de un organismo vivo. El metabolismo consiste en anabolismo (la acumulación de sustancias) y catabolismo (la descomposición de sustancias). El término metabolismo se usa comúnmente para referirse específicamente a la descomposición de los alimentos y su transformación en energía. b. enzimas Las enzimas están formadas por proteínas plegadas en formas complejas; están presentes en todo el cuerpo. Las reacciones químicas que nos mantienen vivos (nuestro metabolismo) dependen del trabajo que realizan las enzimas. Las enzimas aceleran (catalizan) las reacciones químicas; en algunos casos, las enzimas pueden hacer que una reacción química sea millones de veces más rápida de lo que habría sido sin ellas. Un sustrato se une al sitio activo de una enzima y se convierte en productos. Una vez que los productos abandonan el sitio activo, la enzima está lista para unirse a un nuevo sustrato y repetir el proceso. c. endoenzima retenida intracelularmente (dentro de la célula); funciones metabólicas internas, por ejemplo, catalasa, oxidasa, reductasa, peróxido de hidrógeno d. exoenzima activa extracelularmente; descompone moléculas químicas dañinas y grandes moléculas de alimentos; descompone el tejido del huésped y facilita la invasión, por ejemplo. celulasa, amilasa (almidón, glucosa), penicilinasa, queratinasa e. La oxidación es la pérdida de electrones durante una reacción por una molécula, átomo o ion. La oxidación ocurre cuando el estado de oxidación de una molécula, átomo o ion aumenta f. La fermentación es un proceso metabólico que consume azúcar en ausencia de oxígeno. Los productos son ácidos orgánicos, gases o alcohol. Ocurre en levaduras y bacterias, y también en células musculares con falta de oxígeno, como en el caso de la fermentación láctica. 9. Describa las pruebas de fermentación de azúcar. ¿Función del rojo de fenol? Reacción positiva para ácido y gas. El caldo de rojo de fenol es un medio de prueba diferencial de uso general que se utiliza típicamente para diferenciar bacterias entéricas gramnegativas. Contiene peptona, rojo de fenol (un indicador de pH), un tubo de Durham y un carbohidrato. Usamos tres tipos diferentes de caldos de rojo de fenol. Uno contiene glucosa; otro contiene lactosa y el último contiene sacarosa. El objetivo del ejercicio es determinar qué organismos pueden utilizar cada azúcar. El rojo de fenol es un indicador de pH que se vuelve amarillo por debajo de un pH de 6.8 y fucsia por encima de un pH de 7.4. Si el organismo puede utilizar el carbohidrato, se crea un subproducto ácido, que vuelve el medio amarillo. Si el organismo no puede utilizar el carbohidrato pero sí utiliza la peptona, el subproducto es amoníaco, que aumenta el pH del medio y lo vuelve fucsia. Cuando el organismo puede utilizar el carbohidrato, se puede producir un subproducto gaseoso. Si es así, se atrapará una burbuja de aire dentro del tubo de Durham. Si el organismo no puede utilizar el carbohidrato, no se producirá gas y no se formará ninguna burbuja de aire. 10. Describa la prueba de fermentación de ácido mixto y la prueba de fermentación de butanodiol. Nombre los medios, reactivos, reacción positiva El caldo de rojo de metilo (MR) y Voges-Proskauer (VP) se utiliza como parte de las pruebas IMViC como el medio en el que se pueden realizar las pruebas de rojo de metilo y Voges-Proskauer. Se trata de un caldo simple que contiene peptona, tampones y dextrosa o glucosa. Diferentes bacterias convierten la dextrosa y la glucosa en piruvato mediante distintas rutas metabólicas. Algunas de estas rutas producen productos ácidos inestables que se transforman rápidamente en compuestos neutros. Algunos organismos utilizan la ruta del butilenglicol, que produce productos finales neutros, como la acetoína y el 2,3-butanodiol. Otros organismos utilizan la ruta de los ácidos mixtos, que produce productos finales ácidos como el ácido láctico, el ácido acético y el ácido fórmico. Estos productos finales ácidos son estables y permanecen ácidos. La prueba del rojo de metilo consiste en añadir el indicador de pH rojo de metilo a un tubo inoculado con caldo MR-VP. Si el organismo utiliza la ruta de fermentación de ácidos mixtos y produce productos finales ácidos estables, los ácidos superarán los tampones del medio y generarán un ambiente ácido. Al añadir rojo de metilo, si hay productos finales ácidos presentes, el rojo de metilo permanecerá rojo. NOTA: El rojo de metilo se diferencia del rojo de fenol (que se usa en la prueba de fermentación y en las placas MSA) en que es amarillo a pH 6.2 o superior y rojo a pH 4.4 o inferior. El rojo de fenol se vuelve amarillo por debajo de un pH de 6.8. Si confunde estos dos indicadores de pH, tendrá dificultades para interpretar los resultados de la prueba. La prueba VP detecta organismos que utilizan la vía del butilenglicol y producen acetoína. Cuando se agregan los reactivos VP al caldo MR-VP inoculado con un organismo que utiliza la vía del butilenglicol, el producto final acetoína se oxida en presencia de hidróxido de potasio (KOH) a diacetilo. La creatina también está presente en el reactivo como catalizador. El diacetilo reacciona para producir un color rojo. Por lo tanto, el rojo es un resultado positivo. Si, después de agregar los reactivos, hay un color cobre, el resultado es negativo. 11. Las pruebas MR y VP son particularmente útiles en la identificación de Enterobacteriaceae. El caldo Rojo de Metilo (MR) y Voges-Proskauer (VP) se utiliza como parte de las pruebas IMViC como medio en el que se pueden realizar ambas pruebas. Es un caldo simple que contiene peptona, tampones y dextrosa o glucosa. Diferentes bacterias convierten la dextrosa y la glucosa en piruvato utilizando diferentes vías metabólicas. Algunas de estas vías producen productos ácidos inestables que se convierten rápidamente en compuestos neutros. Algunos organismos utilizan la vía del butilenglicol, que produce productos finales neutros, incluyendo acetoína y 2,3-butanodiol. Otros organismos utilizan la vía de ácidos mixtos, que produce productos finales ácidos como ácido láctico, acético y fórmico. Estos productos finales ácidos son estables y permanecerán ácidos. La prueba del Rojo de Metilo consiste en añadir el indicador de pH rojo de metilo a un tubo inoculado de caldo MR-VP. Si el organismo utiliza la vía de fermentación de ácidos mixtos y produce productos finales ácidos estables, los ácidos superarán los tampones del medio y generarán un ambiente ácido. Al añadir rojo de metilo, si hay productos finales ácidos presentes, el rojo de metilo permanecerá rojo. NOTA: El rojo de metilo se diferencia del rojo de fenol (utilizado en la prueba de fermentación y en las placas MSA) en que es amarillo a pH 6,2 o superior y rojo a pH 4,4 o inferior. El rojo de fenol se vuelve amarillo por debajo de un pH de 6,8. Si se confunden estos dos indicadores de pH, será difícil interpretar los resultados de la prueba. La prueba VP detecta organismos que utilizan la vía del butilenglicol y producen acetoína. Al añadir los reactivos VP al caldo MR-VP inoculado con un organismo que utiliza la vía del butilenglicol, el producto final acetoína se oxida a diacetilo en presencia de hidróxido de potasio (KOH). La creatina también está presente en el reactivo como catalizador. El diacetilo reacciona para producir un color rojo. Por lo tanto, el rojo es un resultado positivo. Si, después de agregar los reactivos, hay un color cobre, el resultado es negativo. Las pruebas MR y VP son particularmente útiles en la identificación de las Enterobacteriaceae. 12. Describa la prueba de catalasa y la prueba de oxidasa. ¿Función de estas enzimas? ¿Resultado positivo de la prueba? Para identificar organismos que producen la enzima catalasa. Para diferenciar miembros de las Micrococcaceae catalasa-positivas de las Streptococcaceae catalasa-negativas. Convierte el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno gaseoso. Frote las bacterias en un portaobjetos y agregue peróxido de hidrógeno encima. – Si la bacteria es catalasa-positiva, entonces se forman burbujas de gas oxígeno inmediatamente. – Si la bacteria es catalasa-negativa, entonces no aparecen burbujas. Porque la catalasa convierte el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno gaseoso. Para identificar bacterias que contienen la enzima respiratoria Citocromo C Oxidasa. Es útil para diferenciar las Enterobacteriaceae oxidasa-negativas de las Pseudomonadaceae + Neisseria oxidasa-positivas. – Extienda las bacterias en un portaobjetos y agregue el reactivo reductor. – Si el agente reductor se oxida, las bacterias se vuelven púrpuras. Indica un resultado positivo. – Si las bacterias permanecen transparentes, el resultado es negativo. 13. Nombre dos géneros bacterianos que sean oxidasa-positivos. Es útil para diferenciar las Enterobacteriaceae oxidasa-negativas de las Pseudomonadaceae + Neisseria oxidasa-positivas. 14. Nombre una bacteria que sea catalasa-positiva. ¿Cuál es la importancia de la prueba de catalasa? Para diferenciar a los miembros de las Micrococcaceae catalasa-positivas de las Streptococcaceae catalasa-negativas. Convierte el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno gaseoso. 15. Enumere las enzimas que catalizan las siguientes reacciones: A. Hidrólisis de caseína caseinasa B. Hidrólisis de urea ureasa C. Hidrólisis de almidón amilasas D. Hidrólisis de peróxido de hidrógeno catalasa E. Hidrólisis de triptófano triptofanasa F. Hidrólisis de grasa lipasa 16. ¿Cuáles son los productos finales de la hidrólisis de urea? Dióxido de carbono y amoníaco 17. Describa las pruebas IMViC. ¿Cuáles son los dos organismos que se distinguen utilizando estas pruebas? ¿Cómo se distinguen en función de estas pruebas? La serie IMViC consta de cuatro pruebas definitivas: producción de indol, prueba de rojo de metilo, prueba de Voges-Proskauer y prueba de utilización de citrato. Dado que los organismos bacterianos son similares en características morfológicas y culturales, se utilizan cuatro pruebas bioquímicas para diferenciar entre estas bacterias. Las pruebas IMViC se utilizan para estudiar las características fisiológicas de las bacterias de la familia Enterobacteriaceae, especialmente Escherichia y Enterobacter. Pruebas IMViC de Enterobacter aerogenes 1. Indol: Negativo 2. Rojo de metilo: Negativo 3. Prueba de Voges-Proskauer: Positivo 4. Prueba de citrato: Positivo Pruebas IMViC de Escherichia coli 1. Indol: Positivo 2. Rojo de metilo: Positivo 3. Prueba de Voges-Proskauer: Negativo 4. Prueba de citrato: Negativo 18. ¿Cuáles son los productos finales de la hidrólisis del triptófano? indol, ácido pirúvico y amoníaco 19. Describa los resultados positivos de las siguientes pruebas bioquímicas: A. Utilización de citrato azul intenso B. Hidrólisis de almidón Las áreas donde el almidón ha sido digerido por el crecimiento bacteriano exhiben halos claros en medio de la placa oscura, lo que indica una prueba positiva de alfa-amilasa o hidrólisis de almidón C. Hidrólisis de urea rojo D. Prueba de catalasa amarillo E. Prueba de oxidasa Una prueba positiva (OX+) dará como resultado un cambio de color de violeta a púrpura F. Fermentación de ácidos mixtos (prueba de rojo de metilo) una prueba positiva revela color rojo G. Voges-Proskauer (fermentación de butanodiol) rojo I. Prueba de indol (hidrólisis de triptófano rojo J. Producción de sulfuro de hidrógeno ennegrecimiento K. Desaminación de fenilalanina verde oscuro N. Hidrólisis de caseína claro 20. ¿Cuáles son los medios y reactivos utilizados para: A. Hidrólisis de almidón placa de agar de almidón y yodo de Gram B. Hidrólisis de caseína placa de agar de caseína y sin reactivos C. Ácido mixto Fermentación en caldo simple y rojo de metilo D. Fermentación de butanodiol en caldo MRVP y alfa-naftol, hidróxido de potasio E. Hidrólisis de triptófano (prueba de indol) en agar blando y reactivo de Kovacs G. Hidrólisis de urea en agar inclinado de urea, caldo de urea: contiene extracto de levadura, fosfato monopotásico, fosfato disódico, urea e indicador rojo de fenol. H. Producción de sulfuro de hidrógeno en medio SIM y reactivo de Kovacs I. Desaminación de fenilalanina en agar inclinado de fenilalanina Después de la incubación, se añaden cinco gotas de cloruro férrico 10% y cinco gotas de HCl 0,1 N y se agita suavemente el tubo. Un resultado positivo se indica si se desarrolla un color verde en cinco minutos. J. Prueba de catalasa en peróxido de hidrógeno 21. ¿Cuál es la fuente de caseína? leche 22. ¿Cuál es la importancia de la prueba de oxidasa en la identificación de Pseudomonas y Neisseria? Los géneros bacterianos caracterizados como oxidasa positivos incluyen Neisseria y Pseudomonas. Los géneros de la familia Enterobacteriaceae se caracterizan por ser oxidasa negativos. Los nombres de las bacterias oxidasa positivas son: Campylobacter spp, Helicobacter spp, Aeromonas spp, Vibrio cholerae, Neisseria spp, Pseudomonas spp, Alcaligenes 23. ¿Cuál es la importancia de la prueba de ureasa en la identificación de Proteus? La prueba de ureasa es útil para identificar los géneros Proteus, Providentia y Morganella, que liberan esta enzima. 24. ¿Cuáles son los productos de la hidrólisis de la cisteína? ¿Cuál es la importancia de esta prueba en la identificación de Proteus? Una forma es mediante la utilización de SO42- (sulfato) o S2O32- (tiosulfato) como aceptor final de electrones en la respiración anaeróbica. También hay microbios que pueden oxidar metabólicamente compuestos que contienen S (por ejemplo, cisteína) para obtener carbono y energía. Tiosulfato reductasa y cisteína Las desulfurasas son las enzimas que conducen a la producción de H2S por las dos vías mencionadas anteriormente. El H2S es un gas incoloro, soluble en agua, con olor a huevo podrido. El ion ferroso (Fe2+) es un indicador que se puede utilizar para detectar H2S(g). Se combina con H2S(g) y forma el precipitado negro insoluble sulfuro ferroso (FeS). 25. ¿Cuáles son los productos de la desaminación de la fenilalanina? amoníaco libre. Como resultado de esta reacción, también se produce ácido fenilpirúvico. El agar de fenilalanina, también conocido como medio de fenilalanina desaminasa, contiene nutrientes y DL-fenilalanina. 26. ¿Qué les sucedería a los microbios que producen peróxido de hidrógeno en ausencia de producción de catalasa? Tóxico para las células.

Examen final de laboratorio de microbiología

1. Enumera e identifica las partes de un microscopio compuesto y conoce la función de cada una.
   • Ocular: La lente a través de la cual el observador mira para ver la muestra. El ocular suele tener una lente de 10X o 15X.
   • Ajuste de dioptrías: Útil para cambiar el enfoque de un ocular y corregir así cualquier diferencia de visión entre ambos ojos.
   • Tubo del cuerpo (cabezal): El tubo del cuerpo conecta el ocular con las lentes del objetivo.
   • Brazo: El brazo conectael tubo del cuerpo a la base del microscopio
   • Ajuste grueso: Permite enfocar la muestra de forma general.
   • Ajuste fino: Permite ajustar con precisión el enfoque y aumentar el nivel de detalle de la muestra.
   • Revólver portaobjetivos: Una torreta giratoria que aloja las lentes objetivo. El observador gira el revólver portaobjetivos para seleccionar las diferentes lentes objetivo.
   • Lentes objetivos: Son una de las partes más importantes de un microscopio compuesto, ya que son las lentes más cercanas a la muestra.
   • Un microscopio estándar tiene tres, cuatro o cinco objetivos con aumentos que van desde 4x hasta 100x. Al enfocar, tenga cuidado de que el objetivo no toque la muestra, ya que podría romperla y dañarla.
   • La muestra se coloca sobre el portaobjetos y se cubre con un cubreobjetos. Esto permite insertar y extraer la muestra del microscopio con facilidad. Además, facilita su etiquetado, transporte y almacenamiento sin dañarla.
   • Escenario: La plataforma plana donde se coloca el tobogán.
   • Clips de escenario: Clips metálicos que mantienen la diapositiva en su lugar.
   • Ajuste de altura del escenario (Control de escenario): Estas perillas mueven el escenario hacia la izquierda y la derecha o hacia arriba y hacia abajo.
   • Abertura: El orificio en el centro de la platina que permite que la luz del iluminador llegue a la muestra.
   • Interruptor de encendido/apagado: El interruptor situado en la base del microscopio enciende y apaga el iluminador.
   • Iluminación: La fuente de luz de un microscopio. Los microscopios antiguos utilizaban espejos para reflejar la luz de una fuente externa hacia la parte inferior de la platina; sin embargo, la mayoría de los microscopios actuales utilizan una bombilla de bajo voltaje.
   • Diafragma de iris: Ajusta la cantidad de luz que llega a la muestra.
   • Condensador: Recoge y enfoca la luz del iluminador sobre la muestra que se está observando.
   • Base: La base sostiene el microscopio y es donde se ubica el iluminador.
2. Definición de poder de resolución. El poder de resolución es la capacidad de un microscopio para distinguir dos objetos a su máxima magnificación. Lo mismo ocurre con cualquier otro instrumento óptico. Es como observar dos líneas muy próximas entre sí a simple vista y luego observarlas con un microscopio. A simple vista, parecerán una sola línea, mientras que con el microscopio se verán distintas.
3. Defina la distancia de trabajo. La distancia de trabajo se determina mediante la medición lineal desde la lente frontal del objetivo hasta la superficie de la muestra.
4. Definición de aumento total. El aumento total se determina multiplicando la potencia del ocular (generalmente 10x) por la del objetivo. Por ejemplo, un ocular de 10x y un objetivo de 4x dan como resultado un aumento total de 40x (40x).
5. ¿Qué es la parfocalización? Una lente parfocal es una lente que mantiene el enfoque incluso cuando cambia la magnificación o distancia focal. De hecho, el error de enfoque es tan pequeño que se considera insignificante.
6. ¿Cuál es la resolución de un microscopio compuesto? La resolución es el factor más importante que determina el rendimiento de un microscopio y está determinada por la apertura numérica y la longitud de onda de la luz. No se ve afectada por el aumento, pero sí determina el aumento útil del microscopio.
7. Enumera las características de los protozoos, las algas y las cianobacterias.
   • Cianobacterias = pigmentos fotosintéticos, pared celular; algas = núcleo, pigmentos fotosintéticos, cloroplastos, pared celular; protozoos = núcleo, flagelos, pseudópodos, cilios.
   • Las cianobacterias pertenecen al dominio bacteria, los protozoos al dominio eukarya y las algas al dominio eukarya.
8. ¿Cuál es la importancia de la técnica aséptica? La técnica aséptica implica el uso exclusivo de equipos y fluidos no contaminados. Consiste en esterilizar con una máquina o mediante el paso a través de una llama.
9. Enumera las características de las bacterias. Describe la morfología y la organización bacteriana.
   

   
   Las bacterias se caracterizan por ser procariotas, lo que significa que carecen de orgánulos unidos a membranas, pared celular de peptidoglicano y reproducción asexual, es decir, necesitan multiplicarse por sí mismas. Al observarlas bajo un microscopio óptico, la mayoría de las bacterias presentan variaciones de tres formas principales: la de bastón (bacilo), la esférica (coco) y la espiral (vibrio). De hecho, la estructura de las bacterias tiene dos aspectos: disposición y forma. En cuanto a la disposición, puede ser en pares (diploideos), en racimos de uvas (estafilococos) o en cadenas (estreptococos). En cuanto a la forma, pueden ser principalmente bastones (bacilos), esferas (cocos) y espirales (espirilos). El diámetro promedio de las bacterias esféricas es de 0,5 a 2,0 µm.  En el caso de las bacterias filamentosas o con forma de bastón, la longitud oscila entre 1 y 10 µm. Las tres formas básicas de las bacterias son coco (esférica), bacilo (con forma de bastón) y espiral (retorcida); sin embargo, las bacterias pleomórficas pueden adoptar diversas formas.
10.  Enumera las características de los hongos. Y explica las diferencias entre la levadura y el moho. Los hongos son eucariotas. Se reproducen mediante esporas, tanto sexual como asexualmente. Son avasculares y heterótrofos. Los hongos almacenan su alimento en forma de almidón. Tienen un núcleo pequeño. Digieren su alimento antes de ingerirlo. Son inmóviles. Tienen paredes celulares compuestas de quitina. El moho y la levadura son ambos tipos de hongos. La principal diferencia entre el moho y la levadura es que el moho crece en filamentos multicelulares o hifas, mientras que la levadura crece como una sola célula y no en forma de filamentos multicelulares como el moho.
11. Definición de Micetos. = Eucariotas, poseen ergosterol en la membrana celular. Paredes celulares compuestas de carbohidratos, levaduras y mohos. Saprófitos. = Se alimentan de materia orgánica muerta. Micología. = El estudio formal de los hongos, especialmente en lo que respecta a su biología, clasificación, cultivo, análisis de laboratorio y comestibilidad. Dimórficos. = Los hongos dimórficos son aquellos que existen en forma de levadura o de moho (forma micelial) dependiendo de las condiciones ambientales, las condiciones fisiológicas del hongo o las características genéticas.
12. Enumere los pasos necesarios para la preparación de frotis a partir de medios líquidos y medios sólidos.
    • Extienda una o dos gotas del líquido sobre una superficie amplia de un portaobjetos limpio. Deje que el líquido se evapore (seque al aire) antes de la fijación. Este proceso se realiza pasando el portaobjetos dos o tres veces sobre la llama de un mechero Bunsen. Dado que el portaobjetos puede calentarse, se recomienda usar un soporte. Sin embargo, tenga cuidado de no quemar el organismo. Una fijación adecuada no requiere una exposición prolongada al calor.
    • Coloque una o dos asas de agua en el portaobjetos. Con una aguja de siembra, mezcle una cantidad muy pequeña de la colonia con el agua y extiéndala sobre el portaobjetos. Es fundamental que los microorganismos se mantengan separados entre sí durante este paso. El secado al aire y la fijación por calor se realizan como se describió anteriormente.
13. ¿Cuáles son las razones para fijar la muestra mediante calor durante la preparación del frotis?
    • Hace que las células se adhieran al portaobjetos para que no se desprendan con el lavado.
    • Mata los microorganismos
    • Provoca cambios en las células bacterianas que hacen que se tiñan mejor.
14. Diferenciar entre tinción simple y tinción diferencial.
    • Una tinción simple se basa en el hecho de que las bacterias difieren químicamente de su entorno y, por lo tanto, pueden teñirse junto con él. Una tinción diferencial permite distinguir entre dos tipos de bacterias, ya que estas difieren entre sí química y físicamente, lo que provoca que reaccionen de manera diferente a un procedimiento de tinción determinado.
15. Diferencia entre colorantes básicos y ácidos.
    • Los colorantes básicos tienen carga positiva y reaccionan con los componentes tisulares de carga negativa, mientras que los colorantes ácidos tienen carga negativa y reaccionan con los componentes tisulares de carga positiva. Los colorantes básicos se componen de sales catiónicas de bases coloreadas, y las sales ácidas consisten en sales de ácidos orgánicos sulfúricos, fenólicos o carboxílicos. Los colorantes ácidos se utilizan con mayor frecuencia en laboratorios como baño de tinte y son eficaces para teñir textiles, ya que están compuestos de fibras proteicas. Estos colorantes se adhieren mejor al pelo animal, como la lana o el pelo de alpaca. Los colorantes básicos funcionan mejor tiñendo materiales sintéticos como el nailon, el poliéster, el modacrílico y la olefina.
16. Defina cápsula. ¿Por qué es difícil teñir la cápsula con los métodos habituales?
    • La tinción de cápsula emplea una tinción ácida y una básica para detectar la formación de cápsulas. Las cápsulas son formadas por organismos como Klebsiella pneumoniae. La mayoría de las cápsulas están compuestas de polisacáridos, pero algunas lo están de polipéptidos. La cápsula se diferencia de la capa de mucosidad que producen la mayoría de las células bacterianas en que es una capa gruesa, discreta y detectable fuera de la pared celular. Algunas cápsulas tienen límites bien definidos, y otras tienen bordes difusos y extendidos. Las cápsulas protegen a las bacterias de la acción fagocítica de los leucocitos y permiten que los patógenos invadan el cuerpo. Si un patógeno pierde su capacidad de formar cápsulas, puede volverse avirulento. Las cápsulas bacterianas no son iónicas, por lo que ni las tinciones ácidas ni las básicas se adhieren a sus superficies. Por lo tanto, la mejor manera de visualizarlas es teñir el fondo con una tinción ácida y la célula misma con una tinción básica. Utilizamos tinta china y cristal violeta de Gram. Esto deja la cápsula como un halo claro que rodea una célula púrpura en un campo negro. El medio de cultivo, la temperatura y la antigüedad del cultivo influyen en la formación de cápsulas. Los cultivos más antiguos tienen mayor probabilidad de producir cápsulas. Al realizar una tinción de cápsulas en una muestra desconocida, asegúrese de que el cultivo del que tome la muestra tenga al menos cinco días de antigüedad.
17. Explique el procedimiento de tinción de Gram. ¿Cuál es la función de cada reactivo? ¿Cuál es la diferencia en la apariencia de las bacterias Gram positivas y Gram negativas? ¿En qué se basa esta clasificación?.
    • La tinción de Gram es una técnica común utilizada para diferenciar dos grandes grupos de bacterias en función de los diferentes componentes de su pared celular. El procedimiento de tinción de Gram distingue entre Grupos Gram positivos y Gram negativos coloreando estas células rojo o violeta.  bacterias Gram positivas mancha violeta debido a la presencia de una gruesa capa de glicano peptídico en sus paredes celulares, que retiene el cristal violeta con el que se tiñen estas células. Alternativamente, las bacterias Gram negativas se tiñen rojo, Esto se atribuye a una pared de peptidoglicano más delgada, que no retiene el cristal violeta durante el proceso de decoloración.
    • La tinción de Gram consta de tres procesos: tinción con un colorante soluble en agua llamado cristal violeta, decoloración y contratinción, generalmente con safranina. Debido a las diferencias en el grosor del peptidoglicano de la membrana celular entre las bacterias Gram positivas y Gram negativas, las bacterias Gram positivas (con una capa de peptidoglicano más gruesa) retienen la tinción de cristal violeta durante el proceso de decoloración, mientras que las bacterias Gram negativas pierden la tinción de cristal violeta y, en su lugar, se tiñen con safranina en el proceso de tinción final. El proceso consta de tres pasos:
      • Las células se tiñen con colorante cristal violeta.
      • A continuación, se añade la solución de Gram (yodo y yoduro de potasio) para formar un complejo entre el cristal violeta y el yodo. Este complejo es una molécula más grande que el colorante cristal violeta original, y el yodo es insoluble en agua.
      • Se añade a la muestra un decolorante como alcohol etílico o acetona, que deshidrata la capa de peptidoglicano, contrayéndola y compactándola. El complejo de cristal violeta-yodo, de gran tamaño, no puede penetrar esta capa de peptidoglicano compactada y, por lo tanto, queda atrapado en la célula de las bacterias Gram positivas. Por el contrario, la membrana externa de las células Gram negativas no puede retener el complejo de cristal violeta-yodo y el color se pierde.
      • Se añade a la muestra un colorante de contraste, como la safranina, que es poco soluble en agua, tiñéndola de rojo. Dado que es más claro que el cristal violeta, no altera la coloración púrpura de las células Gram positivas. Sin embargo, las células Gram negativas decoloradas se tiñen de rojo.
    • Protocolo de tinción y consideraciones:
      1. Reactivos: Violeta cristal (tinción primaria); solución de yodo/yodo de Gram (mordiente que fija el violeta cristal a la pared celular); decolorante (por ejemplo, etanol); safranina (tinción secundaria); y agua (preferiblemente en un frasco con dosificador).
         • Prepara una lámina con la muestra celular que se va a teñir. Fija la muestra a la lámina mediante calor, pasando cuidadosamente la lámina con una gota o un pequeño trozo de muestra tres veces por un mechero Bunsen.
         • Agregue el colorante primario (violeta cristal) a la muestra/portaobjetos e incube durante 1 minuto. Enjuague el portaobjetos con un chorro suave de agua durante un máximo de 5 segundos para eliminar el violeta cristal no unido.
         • Añada yodo de Gram durante 1 minuto; este es un mordiente, o un agente que fija el cristal violeta a la pared celular bacteriana.
         • Enjuague la muestra o portaobjetos con acetona o alcohol durante 3 segundos y luego enjuague con un chorro suave de agua. Si la muestra es Gram negativa, el alcohol decolorará la tinción con cristal violeta. Sin embargo, si el alcohol permanece en contacto con la muestra durante demasiado tiempo, también puede decolorar las células Gram positivas.
         • Añada la tinción secundaria, safranina, a la muestra e incúbela durante 1 minuto. Lave con un chorro suave de agua durante un máximo de 5 segundos. Si la bacteria es Gram positiva, retendrá la tinción primaria (cristal violeta) y no absorberá la secundaria (safranina), por lo que se verá de color violeta/púrpura bajo el microscopio. Si la bacteria es Gram negativa, perderá la tinción primaria y absorberá la secundaria, por lo que se verá roja al observarla bajo el microscopio.
18. ¿Cuál es la función de las endosporas? Géneros bacterianos que producen endosporas. Razón por la cual las esporas no se tiñen con los métodos convencionales. Colorantes utilizados y procedimiento para teñir esporas mediante el método de Schaeffer-Fulton.
    • Según la Universidad de Cornell, la función de las endosporas bacterianas es permitir la supervivencia de las líneas celulares bacterianas en condiciones extremas que matarían a un miembro normal de la especie. La tinción de endosporas es una tinción diferencial que tiñe selectivamente las endosporas bacterianas. El objetivo principal de la tinción de endosporas es diferenciar las esporas bacterianas de otras células vegetativas y distinguir entre bacterias formadoras de esporas y no formadoras de esporas.
    • En el método de Schaeffer-Fulton, una tinción primaria-verde malaquita, se introduce en la espora mediante la aplicación de vapor a la emulsión bacteriana.  Verde malaquita es soluble en agua y tiene baja afinidad por el material celular, por lo que las células vegetativas pueden decolorarse con agua. Luego se aplica safranina para teñir de nuevo las células que se hayan decolorado. Al final del proceso de tinción, las células vegetativas estarán rosa, y las endosporas serán verde oscuro.Las esporas pueden ubicarse en el centro de la célula, en un extremo o entre el extremo y el centro. Su forma puede ser esférica o elíptica.
    • Los reactivos utilizados para la tinción de endosporas son: Colorante primario: verde malaquita. Agente decolorante: agua del grifo o destilada. Colorante de contraste: safranina. Y etanol.
    • Toma un portaobjetos limpio y libre de grasa y haz una extensión usando una técnica estéril. Deja secar al aire y fija con calor el organismo en un portaobjetos de vidrio y cúbrelo con un cuadrado de papel secante o toalla cortado al tamaño del portaobjetos. Satura el papel secante con solución de tinción verde malaquita y vaporiza durante 5 minutos, manteniendo el papel húmedo y agregando más tinte según sea necesario. Alternativamente, el portaobjetos puede vaporizarse sobre un recipiente con agua hirviendo. Lava el portaobjetos en agua del grifo. Contratiñe con safranina 0.5% durante 30 segundos. Lava con agua del grifo; seca con papel absorbente. Examina el portaobjetos bajo el microscopio para detectar la presencia de endosporas. Las endosporas son de color verde brillante y las células vegetativas son de color marrón rojizo a rosa.
19. ¿Cuál es la importancia médica de la tinción ácido-resistente? ¿Qué organismos son ácido-resistentes y qué los hace serlo? ¿Qué colorantes se utilizan y cuál es el procedimiento experimental?
    • La tinción ácido-resistente detecta micobacterias tuberculosis/TB y micobacterias leprosas. Esta tinción diferencial se utiliza para identificar microorganismos ácido-resistentes, como los del género Mycobacterium. Los microorganismos ácido-resistentes se caracterizan por tener paredes celulares cerosas, casi impermeables, y contienen ácido micólico y grandes cantidades de ácidos grasos, ceras y lípidos complejos. Es una tinción bacteriológica especial que se utiliza para identificar microorganismos ácido-resistentes. También se puede utilizar para teñir otras bacterias, como Nocardia. Los reactivos utilizados son la fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen, alcohol ácido y azul de metileno. Los bacilos ácido-resistentes se teñirán de rojo brillante.
20. ¿Qué son el método de la gota colgante y el método del tubo para determinar la movilidad?.
    • La preparación de gota colgante es un tipo especial de montaje húmedo (en el que se coloca una gota de medio que contiene los microorganismos sobre un portaobjetos), que se utiliza a menudo en condiciones de poca luz para observar la motilidad bacteriana. En este método, se coloca una gota de cultivo sobre un cubreobjetos recubierto con vaselina (o cualquier otro material adhesivo). A continuación, el cubreobjetos y la gota se invierten sobre el pocillo de un portaobjetos con cavidad. La gota queda suspendida del cubreobjetos y la vaselina forma un sello que impide la evaporación. Esta preparación permite observar con claridad la motilidad microbiana.
    • La motilidad de los organismos patógenos se determina mediante la técnica de punción en agar blando, también conocida como método del tubo. Este método se utiliza debido a la peligrosidad de los organismos patógenos. En él, los organismos se cultivan en un medio que permite su movimiento, el cual se puede observar. Los organismos patógenos inmóviles en el medio simplemente crecen y permanecen en el mismo lugar, mientras que los organismos móviles crecen y comienzan a moverse, creando una turbidez detectable.
    • Al examinar los organismos vivos para determinar si poseen la propiedad de locomoción activa, es esencial distinguir la verdadera motilidad, mediante la cual el organismo se mueve en diferentes direcciones y cambia de posición en el campo.
21. Defina medio de cultivo. ¿Cuál es la función del agar en los medios de cultivo?
    • Un medio de cultivo es un soporte especial utilizado en laboratorios de microbiología para el crecimiento de diferentes tipos de microorganismos. Un medio de cultivo se compone de diversos nutrientes esenciales para el crecimiento microbiano. Una placa de agar es una placa de Petri que contiene un medio de cultivo sólido, generalmente agar con nutrientes, utilizado para cultivar organismos pequeños como microorganismos. En ocasiones, se añaden compuestos selectivos, como antibióticos, para influir en el crecimiento.
22. Definición de autótrofos: Organismo capaz de sintetizar su propio alimento a partir de sustancias inorgánicas, utilizando energía lumínica o química. Ejemplos de autótrofos son las plantas verdes, las algas y ciertas bacterias. Los autótrofos son los productores en una cadena alimentaria, como las plantas terrestres o las algas acuáticas.
23. Definición de heterótrofos = Cualquier organismo que no puede fabricar su propio alimento y, en cambio, obtiene su alimento y energía al ingerir sustancias orgánicas, generalmente materia vegetal o animal.
24. Definición de fotótrofos = Cualquier organismo que obtiene su energía para la síntesis de alimentos a partir de la luz y es capaz de utilizar el dióxido de carbono como su principal fuente de carbono.
25. Definición de quimioautótrofos: Un organismo (generalmente una bacteria o un protozoo) que obtiene energía mediante quimiosíntesis en lugar de fotosíntesis. Los quimioautótrofos utilizan energía química para producir carbohidratos.
26. Los quimioheterótrofos son organismos heterótrofos que no son capaces de fijar carbono para formar sus propios compuestos orgánicos. La mayoría de los quimioheterótrofos obtienen energía ingiriendo moléculas orgánicas como la glucosa.
27. Fotoheterótrofos = Organismo que depende de la luz para obtener la mayor parte de su energía y principalmente de compuestos orgánicos para su carbono. Son organismos heterótrofos que utilizan la energía lumínica como fuente de energía.
28. Factor de crecimiento = Los factores de crecimiento son moléculas reguladoras naturales que se unen a receptores en la superficie celular. Estimulan la función celular y tisular al influir en la diferenciación celular, modificando su actividad bioquímica y el crecimiento celular, y regulando su tasa de proliferación.
29. Diferencia entre medios sintéticos y no sintéticos. Un medio sintético se compone de componentes químicamente definidos. Por otro lado, si contiene compuestos químicamente no definidos (por ejemplo, extracto vegetal, jugo de fruta o extracto de planta), se considera un medio natural.
30. Diferencia entre medios selectivos y diferenciales. Los medios selectivos y diferenciales son dos tipos de medios utilizados para aislar e identificar microorganismos. La principal diferencia radica en que los medios selectivos se utilizan para aislar una cepa específica, mientras que los diferenciales se emplean para identificar y diferenciar un grupo de microorganismos estrechamente relacionados. Los medios selectivos utilizan las características de crecimiento específicas de un microorganismo para cultivarlo selectivamente en el medio de cultivo. Los medios diferenciales permiten caracterizar diversos microorganismos según sus patrones de crecimiento.
31. Tiempo y temperatura utilizados en la esterilización en autoclave. También se emplean en aplicaciones industriales, especialmente en lo que respecta a materiales compuestos. Muchos autoclaves se utilizan para esterilizar equipos y suministros sometiéndolos a vapor saturado a alta presión a 121 grados Celsius o 249 grados Fahrenheit durante aproximadamente 15 a 20 minutos, dependiendo del tamaño de la carga y su contenido.
32. Método utilizado para aislar organismos en un cultivo puro. Un cultivo puro contiene, teóricamente, una sola especie bacteriana. Existen diversos procedimientos para aislar cultivos puros a partir de poblaciones mixtas. Un cultivo puro puede aislarse mediante el uso de medios especiales con agentes químicos o físicos específicos que permiten el enriquecimiento o la selección de un organismo sobre otro. Se puede utilizar la siembra en placa o en estrías para aislar células bacterianas individuales en un medio nutritivo. Ambos procedimientos requieren el conocimiento de la técnica aséptica. La asepsia se define como la ausencia de microorganismos infecciosos. Sin embargo, el término se aplica generalmente a cualquier técnica diseñada para evitar que microorganismos no deseados contaminen materiales estériles.
33. ¿Cuáles son los pasos que implica el cultivo cuantitativo en placa?.
    1. Se utiliza para medir el crecimiento bacteriano mediante el recuento del número de células bacterianas.
    2. Técnica principal: dilución (reducción de la concentración).
    3. Dilución en serie y siembra en placa (verter o extender). Las diluciones son útiles en ciencia para preparar soluciones o cultivar un número suficiente de colonias bacterianas para su recuento. Existen tres fórmulas para resolver problemas de dilución en microbiología: calcular diluciones individuales, calcular diluciones en serie y calcular el número de microorganismos en la muestra original. Placa contable = de 30 a 300 colonias.
34. La temperatura óptima es aquella a la que se lleva a cabo mejor un procedimiento, como por ejemplo el cultivo de un organismo determinado o la acción de una enzima.
35. La temperatura máxima es aquella a la que se realiza mejor un procedimiento, como por ejemplo el cultivo de un organismo determinado o la acción de una enzima.
36.  La temperatura mínima es aquella a la que un organismo es capaz de crecer, que oscila entre los 0 y los 30 grados Celsius aproximadamente.
37. Los hipertermófilos o termófilos extremos son microbios pertenecientes al orden de las arqueas que tienen una temperatura óptima de crecimiento de 80 grados Celsius o superior.
38. Un mesófilo es un organismo que crece mejor a temperaturas moderadas, ni demasiado altas ni demasiado bajas, generalmente entre 20 y 45 grados Celsius (68 y 113 grados Fahrenheit). La temperatura óptima es de 37 grados Celsius. El término se aplica principalmente a microorganismos.
39. Los psicrófilos o criófilos son organismos extremófilos capaces de crecer y reproducirse a bajas temperaturas, que oscilan entre -20 °C y +10 °C. Se encuentran en lugares permanentemente fríos, como las regiones polares y las profundidades marinas.
40. Un termófilo es un organismo (un tipo de extremófilo) que prospera a temperaturas relativamente altas, entre 41 y 122 grados centígrados (106 y 252 grados Fahrenheit). Se cree que muchas eubacterias termófilas se encuentran entre las bacterias más antiguas.
41. El tiempo de muerte térmica es el tiempo que se tarda en eliminar una bacteria específica a una temperatura determinada. Originalmente se desarrolló para el enlatado de alimentos y se ha aplicado en otras industrias.
42. El punto de muerte térmica es la temperatura a la cual todos los organismos de un cultivo mueren por efecto del calor, ya sea instantáneamente o dentro de un breve período finito arbitrario.
43. Una solución hipotónica es aquella cuya concentración molar total de partículas de soluto disueltas es menor que la de otra solución. En una solución hipotónica, una célula estallará.
44. Una solución hipertónica es aquella cuya concentración molar total de partículas de soluto disueltas es mayor que la de otra solución. En una solución hipertónica, una célula se encoge.
45. Una solución isotónica es aquella que tiene la misma osmolaridad, o concentración de soluto, que otra solución. Si estas dos soluciones están separadas por una membrana semipermeable, el agua fluirá en partes iguales desde cada solución hacia la otra. En una solución isotónica, la célula mantendrá su estructura.
46. Plasmólisis: Contracción del protoplasma separándose de la pared celular de una planta o bacteria debido a la pérdida de agua por ósmosis, lo que da como resultado la formación de huecos entre la pared celular y la membrana celular.
47. Los osmófilos son microorganismos adaptados a ambientes con alta presión osmótica, como aquellos con alta concentración de azúcar. Son similares a los organismos halófilos (que prefieren la sal) porque un aspecto crucial de ambos tipos de ambiente es su baja actividad de agua. Las altas concentraciones de azúcar representan un factor limitante para el crecimiento de muchos microorganismos; sin embargo, los osmófilos se protegen contra la alta presión osmótica mediante la síntesis de osmoprotectores como alcoholes y aminoácidos. Muchos microorganismos osmófilos son levaduras, y diversas bacterias también son osmófilas.
48. Un halófilo es un organismo que prospera en un ambiente de alta salinidad.
49. Los antisépticos son sustancias que eliminan o inhiben el crecimiento y desarrollo de microorganismos en la piel, heridas y tejidos del cuerpo. Tanto los antisépticos como los desinfectantes se utilizan para eliminar o limitar el crecimiento de microorganismos; sin embargo, se diferencian en el lugar donde se aplican. Los desinfectantes están diseñados para destruir microorganismos que pueden infectar objetos inanimados. Algunos ejemplos de antisépticos comunes son los enjuagues bucales y las cremas para el tratamiento de infecciones por hongos. Ambos actúan eliminando microbios, pero los antisépticos deben causar poco o ningún daño a los tejidos del cuerpo, mientras que los desinfectantes no necesitan ser seguros para su uso en tejido vivo. También se les conoce como antibacterianos y son medicamentos que destruyen o ralentizan el crecimiento de bacterias.
50. La zona de inhibición es la región transparente que rodea el disco de papel saturado con un agente antimicrobiano sobre la superficie del agar. Esta región transparente indica la ausencia o la inhibición efectiva del crecimiento microbiano por parte del agente antimicrobiano.
51. El método de Kirby-Bauer para evaluar la sensibilidad a los antibióticos también se conoce como prueba de difusión en disco o prueba de difusión en agar. Es una prueba para determinar la sensibilidad de las bacterias a los antibióticos. Utiliza discos de antibióticos para evaluar el grado de afectación bacteriana por dichos antibióticos.
52. El metabolismo comprende todos los procesos bioquímicos que ocurren en un organismo vivo. Se compone de anabolismo (la síntesis de sustancias) y catabolismo (la descomposición de sustancias). El término metabolismo se usa comúnmente para referirse específicamente a la descomposición de los alimentos y su transformación en energía.
53. La fermentación es un proceso metabólico que consume azúcar en ausencia de oxígeno. Los productos resultantes son ácidos orgánicos, gases o alcohol. Ocurre en levaduras y bacterias, y también en células musculares con falta de oxígeno, como en el caso de la fermentación láctica.
54. Endoenzimas retenidas intracelularmente (dentro de la célula); funciones metabólicas internas, por ejemplo: catalasa, oxidasa, reductasa, peróxido de hidrógeno.
55. Las exoenzimas activas extracelularmente descomponen sustancias químicas dañinas y moléculas grandes de alimentos, degradan el tejido del huésped y facilitan la invasión, por ejemplo: celulasa, amilasa (almidón, glucosa), penicilinasa, queratinasa.
56. La oxidación es la pérdida de electrones durante una reacción de una molécula, átomo o ion. La oxidación ocurre cuando aumenta el estado de oxidación de una molécula, átomo o ion.
57. Las enzimas están formadas por proteínas plegadas en estructuras complejas y se encuentran presentes en todo el cuerpo. Las reacciones químicas que nos mantienen vivos —nuestro metabolismo— dependen del trabajo que realizan las enzimas.
58. Función de la catalasa- La catalasa es una enzima común, presente en casi todos los organismos vivos. Cataliza la conversión del peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno, y protege a los organismos de los radicales libres. También tiene usos industriales para prevenir ciertos contaminantes en los alimentos y como desinfectante para lentes de contacto y como agente limpiador en algunos otros productos.
59. Función de la ureasa: La ureasa está presente en muchas bacterias, hongos y plantas superiores. Su función principal es permitir que estos organismos obtengan nitrógeno. Sin embargo, la ureasa presente en las bacterias del suelo también puede hidrolizar la urea del fertilizante, lo que provoca su pérdida.
60. Función de la amilasa- La función principal de una enzima amilasa es descomponer los almidones, Esto da como resultado azúcares simples como la fructosa, la maltosa, la glucosa y la dextrina. Esta función de la amilasa se produce en el cuerpo humano, pero también se utiliza en el procesamiento de alimentos y bebidas, así como en otras industrias.
61. Función de la lipasa: Una lipasa es cualquier enzima que cataliza la hidrólisis de las grasas. Las lipasas son una subclase de las esterasas. Desempeñan funciones esenciales en la digestión, el transporte y el procesamiento de los lípidos de la dieta en la mayoría, si no en todos, los organismos vivos. Los genes que codifican las lipasas están presentes incluso en ciertos virus. La mayoría de las lipasas actúan en una posición específica del esqueleto de glicerol de un sustrato lipídico.
62. Función de la triptofanasa: función de la enzima: descomposición del indol en amoníaco y piruvato. Reacción química: - Rosa: positivo para indol. - Blanco: negativo para indol; no hay indicador de pH.
63. Importancia de la prueba de oxidasa: La prueba de oxidasa se utiliza para identificar bacterias que producen citocromo c oxidasa, una enzima de la cadena de transporte de electrones bacteriana. (Nota: Todas las bacterias que dan positivo a la prueba de oxidasa son aerobias y pueden usar oxígeno como aceptor final de electrones en la respiración. Esto NO significa que sean aerobias estrictas. Las bacterias que dan negativo a la prueba de oxidasa pueden ser anaerobias, aerobias o facultativas; el resultado negativo simplemente significa que estos organismos no poseen la citocromo c oxidasa que oxida el reactivo de la prueba. Pueden respirar utilizando otras oxidasas en el transporte de electrones).
64. Importancia de IMViC-Mediante la prueba IMViC se determinarán las propiedades bioquímicas y las reacciones enzimáticas de las enterobacterias. La prueba IMViC determinará si son patógenas, ocasionalmente patógenas o forman parte de la flora intestinal normal.
65. 1. Fermentación de azúcar tubular de Durham
66. Fermentación de ácidos mixtos 
67. Fermentación de butanodiol-

67. Fermentación de catalasa- 68. Fermentación oxidasa-  69. Hidrólisis del almidón-  70. Hidrólisis de la caseína-  71. Triptófano Hidrólisis-  72. Hidrólisis de la urea-  73. Producción de sulfuro de hidrógeno- 74. Utilización de citrato- 75. IMViC-   76. Desaminación de fenilalanina-